一年一度的 3.15 晚会如期而至，此次晚会中报道的河北省青县肉羊养殖户违禁使用“瘦肉精”的问题引起了广泛关注。针对此次曝光的事件，农业农村部高度重视，并连夜派工作组调查瘦肉精羊肉。
瘦肉精是一类作用于 β2 肾上腺素受体、加强脂肪分解、促进蛋白合成、提高瘦肉率的药物。肉制品中的“瘦肉精” 通过食物链进入人体，可以在人体内蓄积。若长期摄入含有“瘦肉精”残留的动物性食品，能引起心动过速、肌肉震颤、酸疼、恶心、失眠等一系列症状，还可能导致染色体畸变，诱发恶性肿瘤和致畸作用。因此“瘦肉精”严重影响了消费者的身体健康，甚至威胁到人们的生命安全。
针对瘦肉精检测，安捷伦科技依托于其样品前处理、液相色谱、液质联用和消耗品等技术，提供多套完整的全流程的解决方案，助您放心享受美味。
以下方法分析仪器均采用 Agilent 1290 Infinity 高效液相色谱系统及 Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统。
图 1. Agilent 1290 Infinity 高效液相色谱系统及 Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统
方案一、Bond Elut Plexa PCX 法
1、样品前处理
1.1 样品预处理
称取 2 g 左右的均质样品（精确至 0.1 g），依次添加 20 mL 的 0.2 mol/L 乙酸铵缓冲液和 50 μL 的 10000 units/mg ?-葡萄糖甙酶/芳基硫酸酯酶，混合均匀后，37 °C 下反应过夜(14-16 h)，取出冷却后，5000 r/min 离心 5 min，移取上层清液，加 0.1% 高氯酸溶液调节 pH 至 1.0±0.3，5000 r/min 离心5 min，再次移取上层清液，加 10 mol/L NaOH 溶液调节 pH 至 11.0，依次加入 10 mL 饱和 NaCl 溶液和 10 mL 异丙醇:乙酸乙酯 (6:4) 混合溶液，萃取后离心，取有机相，氮气下吹至近干后，用 5 mL 乙酸铵缓冲液溶解，待净化。
1.2 样品前处理
图 2. 固相萃取步骤
2、色谱条件
色谱柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18，3.0 x 100 mm, 2.7 μm（部件号：695575-302）
柱温：40 °C
进样量：2 μL
自动进样器温度：10 °C
流动相：A) 含 0.1% 甲酸和 2.5 mmol/L 乙酸铵的水溶液；B) 含 0.1% 甲酸的乙腈
流速：0.4 mL/min
梯度程序：请参考安捷伦出版物 5991-7204CHCN
3、结果与讨论
如图 1 所示，采用配有 Poroshell 120 EC-C18 色谱柱的安捷伦三重四极杆液质联用系统，可在 15 min 内对 0.1 ng/mL 混合标准溶液中 18 种 β?受体激动剂类兽药进行有效分离，且分离效果及峰形均能满足方法要求。Poroshell 120 EC-C18 色谱柱具有较高柱效、较低柱压和较高载样量等特点，非常适合分析动物源性样品基质中的多药物残留。流动相中添加了 0.1% 甲酸和 2.5 mmol/L 乙酸铵，可以有效促进正模式下的离子化效率。
通过 S/N≥10，计算得到 18 种 β?受体激动剂类兽药的定量下限均可达到 0.05 μg/kg，完全满足动物源性食品中 β?受体激动剂类兽药的限量检测要求。
图 3. 18 种 β-受体激动剂类兽药混合标准溶液 (0.1 ng/mL) 的 MRM 叠加图
方案二、Bond Elut QuEChERS 法
1、样品前处理
1.1 酶解
称取5±0.05 g（精确至0.01 g）试样于50 mL离心管中，加入50 μL混合内标工作溶液，10 mL 0.2 mol/L乙酸铵缓冲液，50 μL β-盐酸葡萄糖醛甘酶/芳基硫酸酯酶，涡旋混匀，振荡10 min，于37 ℃下避光水浴酶解16 h。
1.2 提取净化
图 4. Bond Elut QuEChERS 法固相萃取流程
图 5. Agilent Bond Elut QuEChERS 产品
2. 色谱条件
色谱柱：Agilent Zorbax RRHD Eclipse Plus C18 150 x 3 mm，粒径1.8 μm（部件号：959759-306）
流动相：A）0.1％甲酸溶液（含2 mmol/L乙酸铵），B）0.1％甲酸甲醇
流速：0.4 mL/min
进样量：2 μL
流动相梯度洗脱程序见表 1
方案三、Captiva EMR-Lipid 快速法，无需酶解
1. 样品前处理
* 混内标：沙丁胺醇和莱克多巴胺的 D3 内标浓度均为 1ng/mL，克伦特罗 D9 内标浓度为 0.1ng/mL
图 6. Captiva EMR-Lipid 法固相萃取流程
图 7. Agilent Captiva EMR-Lipid 产品
2. 色谱条件
色谱柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18，3.0×100mm，2.7µm（部件号：959759-306）
柱温：30℃
进样体积：5µL
流动相A：水相（含2mM的乙酸铵、0.1%甲酸）
流动相B：0.1% FA 乙腈
流速：0.4 mL/min
梯度程序：0~2min，5% B；2~6min，5%~60% B，6.1~8min，100% B；8.1min，5% B；后运行 2min
3. 结果与讨论
3.1 方法的回收率与精密度：
取空白样品进行添加回收和精密度实验，向空白猪肉和猪肝中添加三个浓度水平的混合标品，在不同的添加水平下得克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的在猪肉中的回收率分别在 96.1%~104.6%，84.6%~102.6%，90.9%~107.6%之间，RSD（n=3）小于 9.0；在猪肝中的回收率分别在 97.8%~116.7%，87.9%~92.3%，86.8%~92.8% 之间，RSD<5（n=3）。
表 2. 不同添加水平下的回收率和 RSD（n=3）
3.2 基质效应：
以相同浓度（克伦特罗为 0.06ng/mL，沙丁胺醇和莱克多巴胺为 0.6ng/mL）的基质标和溶剂标的峰面积之比乘以 100% 来考察不同基质中克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺的基质效应，结果表明，三者在猪肉中的基质效应为 72.9%~83.0%；在猪肝中的基质效应为 63.8~118.0%。
图 8. 基质效应结果
以上为安捷伦的多种“瘦肉精”分析方法，能够快速有效的去除动物源食品中的脂质，确保数据的准确性，同时简化前处理，提高实验效率，助您快速应对，保证食品安全。
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